Bacillus gelatini 로부터 열 안정성 esterase의클로닝과 특성 규명

Abstract

Ketoprofen [(R, S)-2-(3-benzoylphenyl) propinic acid]은 비 스테로이드 항염증약 NSAID (nonsteroidal anti-inflammatory drug)으로서 염증을 가라앉히는데 널리 사용되며, 관절염이나 화상 그리고 월경의 과다한 분비 및 체열을 경감시키는 데 쓰인다. 특히 항염증 활성은 주로 (S)-ketoprofen에서 나타나며, (R)-ketoprofen은 위장계의 부작용을 나타낼 수 있다. 따라서 순수한 (S)-ketoprofen을 생산하기 위하여 화학적 방법과 생물학적 방법이 주로 사용된다. (S)-ketoprofen을 생산할 때 사용되는 recemic-ketoprofen ethyl ester를 잘 녹이기 위하여 높은 온도가 필요하며, 이에 따라 높은 온도에도 활성을 유지할 수 있는 thermostable esterase가 필요한다. 본 실험의 목적은 다양한 문헌 및 특허를 통해 다양한 종류의 호열성 균주를 선별하여 높은 온도에서 ketoprofen ethyl ester를 (S)-ketoprofen으로 가수 분해할 수 있는 thermostable esterase를 찾는 것이다. 선별된 Bacillus gelatini의 genomic DNA를 추출하고 제한효소로 처리한 후 pQE30과 ligation하여 Escherichia coli XL1 blue에 transformation한다. 정제된 esterase의 특성과 ketoprofen ehyl ester에 대한 반응을 HPLC를 통해 측정한다.