Saccharomyces cerevisiae로부터 S-Adenosylmethionine synthetase 유전자의 클로닝과 특성연구

Abstract

S-Adenosylmethionine(SAM)은 생체내에서 methllyl group 공여체 또는 생장에 관련된 물질의 전구체로서 다양한 기늘을 갖는 필수 물질이다. 이러한 SAM은 SAM synthetase에 의하여 ATP와 L-methionine으로부터 합성된다. Saccharomyces cereviae의 SAM synthetase gene을 cloning하기 위하여 이미 알려진 유전자 염기서열을 바탕으로 primer를 제작하여 PCR을 통하여 증폭시켰다. 증폭시킨 SAM synthetase gene은 E. coli XL1-Blue를 숙주로하여 pQE30에 cloning하였고 염기서열을 결정하였다. 유전자의 염기서열 분석 결과 보고된 S .cerevisiae와는 99%가 일치하였으며, 다른 gene의 효소 및 곰팡이와는 80% 정도의 상동성을 나타내었다. 또한 염기서열에 의해서 아미노산 서열의 추정결과에서 총 384개의 아미노산으로 이루어진 약 41kDa의 분자량을 가진 효소로서 기질인 ATP 및 merhionine과 metal ion(Mg2+)의 binding site가 잘 보존되어 있음을 확인 하였다. 그러나 이 유전자는 E .coli에서 발현시켜 분리 한 후에 효소활성을 측정하였다. 효소 활성은 나타나지 못하였다. 따라서 숙주세포를 E. coli 대신 효소인 Pichia pastoris에서 발현시켜 효소활성을 측정할 예정이다.