리포좀을 이용한 Ascorbic acid 전구체의 안정화

Abstract

Ascorbic acid는 콜라겐의 합성에 매우 중요한 역할을 하는 물질로 대부분의 동식물 등은 생합성 하지만 원숭이, 인간 등은 L-gulonolactone oxidase(GULO)생산능력이 없기 때문에 반드시 음식으로 섭취하여 보충해야만 한다. 한편 Ascorbic acid의 결핍은 hydroxyproline과 hydroxylysine을 생성하는 hydrogylase의 활성을 저해해 콜라겐 합성 저해 및 괴혈병의 원인이 된다. 주로 Ascorbic acid는 경구형태로 생체에 공급되는데, 이 경우 Ascorbic acid의 유효량 전달 시간이 길게 되고 생체내 희석으로 인해 표적하는 세포나 조직에 대한 유효 적용 농도가 낮아지게 된다. 그러므로 피부에 직접 경피 투여 방식으로 Ascorbic acid을 피부에 흡수 시키면 Ascorbic acid이 피부에서 활성화 되는 양을 증가 시킬 수 있다. 그러나 Ascorbic asid은 안정성이 낮아 쉽게 산화되고, 또한 친수성인 Ascorbic acid이 소수성 각질층을 투과하여 진피층에 도달하기 어렵다. 따라서 본 연구에서는 상기 문제점인 Ascorbic acid의 체내활성을 증가 시키기 위해서 Ascorbic acid보다 안정성이 높은 Ascorbic acid의 전구체인 AA2G을 Liposome에 포집 제조하여 AA2G의 피부투과도를 향상과 Ascorbic acid의 체내활성 증가를 수행하고자 한다. Ascorbic acid이 HDFs세포와 HaCaT세포 생장에 미치는 영향에 대해 MTT assay를 통해 확인하였다. HDFs세포에 AA2G을 0.01, 0.1, 1, 10μg/mL처리시 세포증식율은 대조군 대비 각각 111.2, 127.3, 140.3, 153.6%이었고 AA2G을 HaCaT 세포에 0.01, 0.1, 1, 10μg/mL처리시 세포증식율은 대조군 대비 각각 113.8, 131.1, 145.9, 152.7%이었다. 또한 HDFs 를 대상으로 FACS 분석을 수행했다. UVA 가 조사된 NHDFs은 비조사 NHDFs 에 비해 ROS 생성이 약 154% 촉진되었다. UVA 조사 대조군과 비교했을 때 동일한 양의 UVA 가 조사된 10 μg/mL AA2G처리 그룹에서는 45.7% 를 제거하였다. HDF배양액에 AA2G을 0.01, 1, 10μg/mL 처리시 Collagen은 대조군 대비 각각 145.3, 168.4, 170.9%증가 하였고 Elastin은 125.6, 125.3, 125.8%증가하였다. 이와 같은 결과로 미루어 보아 AA2G가 피부탄력에 긍정적인 영향을 미치는 것이 검증되었다. 이러한 AA2G가 피부 깊숙이 침투하기 위해 이용한 Liposome봉입율 시험은 총 3단계로 진행 되었으며 그 중 결과가 가장 좋은 Liposome은 Detergent로 SDS을 이용하고 Edge activator는 Sapn 20, 최적 pH5에서 AA2G을 89%를 이상 봉입하는 것을 확인 하였다. 결론적으로 본연구에서는 AA2G을 봉입한 Liposome의 경피 투여 방법은 AA2G Solution의 경피 투여 방법 보다 많은 양의 AA2G의 흡수율을 보이고 더 많은 양의 Ascorbic acid이 피부에 활성 됨을 검증하였다.