HPLC를 이용한 Metformin Hydrochloride 분석 및 정량법 검증 연구

Abstract

경구용 혈당강하제인 Metformin Hydrochloride의 시험방법은 대한약전(KP), 미국약전(USP), 유럽약전(EP)에 등재되어 있으며, 그 정량법은 적정종말점검출법의 전위차 적정법를 이용하여 분석한다. 하지만 등재되어있는 분석법은 분석시간이 많이 소요되고 분석오차가 크다는 단점이 있다. 따라서 본 연구에서는 적정종말점검출법의 전위차 적정법으로 관리되고 있는 분석법을 간편하고 분석의 신속함과 신뢰성을 증가시키고 분석오차를 줄일 수 있는 HPLC를 이용한 Metformin Hydochloride의 분석 및 정량법을 연구하고, 특이성(Specificity), 직선성(Linearity), 정확성(Accuracy), 정밀성(Precision)과 같은 밸리데이 션 파라미터를 이용하여 그 적정성을 검증(Method validation)하였다. Metformin hydrochloride의 정량법을 최적화하기 위하여 분석을 위한 칼럼은 C18 Capcellpak(Type: UG120, 5㎛, 4.6mm I.D x 250 mm, Shiseido, Japan)column를, 이동상의 유속은 0.8 mL/min 으로 하였고, UV 검출 파장은 233 nm, 오븐 온도는 25 ℃로 일정하게 유지시켰다. 이동상 용매로 10mM Ammonium Phosphate Monobasic Buffer 와 Acetonitril 을 80 : 20으로 혼합하여 시료를 20㎛를 주입하여 최적의 HPLC 분석조건을 설정하였다. Metformin hydrochloride을 10 ppm 으로 조제하여 위와 같은 조건으로 분석을 한 결과 Metformin hydrochloride은 233nm에서 최대 흡수를 보였다. 또한 약 3.5분의 머무름 시간을 나타내었다.