GC-MS 법을 이용한 Leuconostoc mesenteroides 내의 아미노산 프로파일 분석 연구

Abstract

기체크로마토그래피-질량분석법의 선택적인 이온 모드를 이용하여 N-Ethoxycarbonyl/tert-butyldimethylsilyl(EOC/TBDMS) 유도체로써 Leuconostoc mesenteroides 균주에서의 단백질성과 비단백질성 아미노산의 동시 프로파일 분석을 위한 효율적인 방법이 개발 되었다. 본 연구에서는 29 종의 아미노산에 대하여 염기성 수용액 (pH12) 상태에서 아미노기와 티올기를 메틸렌클로라이드층에 들어있는 ethyl chloroformate와 반응시켜 EOC 유도체화 한 다음, 10% 황산으로 pH를 산성으로 조절한 후, diethyl ether와 ethyl acetate를 이용하여 추출하고, 질소 기류 하에서 완전히 건조시켰다. 그리고 남아 있는 활성 수소를 직접 기체크로마토그래프-질량분석기로 분석하기 위해 TBDMS 유도체화 하였다. 최적의 조건에서, 분석법에 대한 타당성 검증결과 0.02-5.0 g/L 범위에서 r=0.999 이상으로 좋은 직선성을 나타냈고, 정밀도 (% RSD)는 14.2 이하였고, 정확도 (% RE)는 -13.9~11.1로 나타났다. 최종적으로 본 아미노산 프로파일링 분석법을 Leuconostoc mesenteroides의 균주와 배지에 적용해 본 결과, 총 19 종의 단백질성 아미노산과 10 종의 비 단백질성 아미노산이 검출 되었다. 그러므로, 본 연구에서 개발된 분석 방법은 다양한 미생물 균주와 배지에서 아미노산의 프로파일 분석에 유용하게 사용될 것으로 사료된다.