Protein Kinase C-γ 에 의한 c-Met 활성 증가의 기전

Abstract

Protein kinase C (PKC) family는 11가지의 isoenzyme으로 이루어져 있고 hepatocyte growth factor receptor 인 c-Met의 tyrosine kinase activity를 down modulation 한다고 보고되어왔다. 하지만 HGF/c-Met의 신호 전달에 있어서 각각의 PKC isoenzyme이 어떠한 역할을 하는지는 아직 밝혀지지 않았다. 본 연구에서는 PKC isoenzyme 중 하나인 PKC-γ가 HGF/c-Met의 신호 전달에 미치는 영향과 그것의 기전을 연구하였다. 이전에 알려진 것과는 반대로 PKC-γ가 transfection된 NIH3T3 세포주에서 Met의 활성이 증가하는 up-modulation 현상을 최초로 관찰하였다. 이러한 Met의 autophosphorylation의 증가는 PKC-γ의 inhibitor인 Go6976에 의해서 저해되었다. 또한 PKC-γ가 transfection된 NIH3T3 세포주에서 Met의 downstream signaling molecule인 Erk의 인산화도 parental NIH3T3 cell에 비해 현저히 증가하였다. PKC-γ의 activity을 살펴보기 위하여 membrane으로의 translocation을 살펴본 결과, HGF 처리 후에 PKC-γ가 membrane으로 이동하는 현상은 관찰할 수 없었지만 많은 양의 PKC-γ가 PKC-α와는 다르게 membrane에 constitutive하게 위치하고 있었다. 또한 PKC-γ는 Met과 결합하고 있음을 co- assay로 확인하였다. PKC-γ가 어떠한 기전을 통해서 Met의 activity에 영향을 주는지 알아보기 위해서 PKC-γ/NIH3T3 세포주에서 Met을 immunoprecipitation하고 phospho-Serine 항체를 이용하여 살펴본 결과 Met의 serine이 인산화 되는 것을 볼 수 있었다. 따라서 PKC-γ가 Met의 serine을 인산화 시키는 자리를 찾기 위해서 Met의 cytosol 부분을 나누어 GST fusion protein을 제작하였다. In vitro kinase assay 결과 PKC-γ는 Met의 juxtamembrane 부분을 direct하게 인산화시킴을 알 수 있었고 이 부분의 peptide를 MALDI-TOF로 분석한 결과 serine1020 임이 확인되었다.